用在线代理，如51proxy之类，这个可能是现阶段最方便的办法，随便在搜索引擎搜索“在线代理”或者 “webproxy”就可以得到。限制最小，缺点是不同的在线代理速度不一，而且网址被重 新编码，无法查看真实的链接地址，大部分还带广告。另外，一些老牌的在线代理也经常被G*FW。这里精华之家向大家推荐几个比较好的吧，个人使用或者收藏 的。
http://www.coobai.com/，http://www.5uproxy.net/（个人比较喜欢的）
www.proxylord.com，www.cacheless.org
www.proxylord.com，www.cacheless.org
kproxy.com，http://www.msproxy.net
Moire2.Com，http://proxify.com
www.proxyfoxy.com，http://www.aplusproxy.com
https://kproxy.com，http://62.193.235.46
Moire2.Com，http://www.atunnel.com
除去上面的一些外，这里推荐友天涯海阁博客提供的一些代理，个人也尝试过，还不错：1.Inblogs:用来访问blogspot的在线代理网站，并且也可以用http://www.inblogs.net/blogname来访问你的blogspot。另一个以前用来访问Blogspot的在线代理网站pkblogs好像已经不能使用了。2.Anonymouse:速度一般，不过一直比较稳定，一直都能使用。3.WebProxy:免费在线代理，不过有时会出现乱码的现象。4.X4ce:速度一般，有时需要尝试多次才行。5.U9H:速度还不错，没有广告，可以显示是否显示图片，Scripts等。（推荐）6.Proxycrew:速度不错，也没有广告跳出。（推荐）7.9i7.cn:国内的一个在线代理网站，速度还不错。并且还提供分享代码，使你可以在自己的Blog使用代理服务。8.Cemsg:速度有一点慢，转入网站之前有广告。9.68Q.NET:速度不错，界面也很简洁，载入没有广告。（推荐）
2009年2月20日星期五
保护脊柱每天只需8分钟
标签：
健康
现在不论男女老少，几乎人人都念叨着腰酸背痛，脊柱不好。脊柱的保健工作真的很难做吗？专家告诉我们，其实，只要每天花上8分钟，就能让我们的脊柱挺起来。
为大家推荐了以下简单易学的脊柱保健操：
第一节：隔墙看戏 首先踮起脚尖，立起脚后跟，躯干拉直，脖子伸长，下巴往上抬。这节操最大的特点就是用自己的肌肉把自己的后背整个的肌肉拉直，相当于把脊柱拉直，做自我牵引。每天只需做三分钟。
第二节：十点十分操 当两只手侧平举的时候，在表针上叫9∶15，这个时候各向上5个刻度，就变成了十点十分。每当手臂上来下去时，可摸一下自己颈部的肌肉，随着这个过程，支撑脖子的肌肉能得到有效的锻炼。注意手一定放在自己的两侧，往后张开。每天做1分钟。
第三节：头手对抗 两只手交叉着放在自己的枕后部，然后保持双眼平视前方，你的颈椎是自然正常的位置，你的手向前用力，头向后用力，这样用力、放松，一方面提高颈后肌肉的力量，一方面能促进颈后的血液循环，对颈椎是非常好的保健动作。可以缓解肌肉的疲劳，特别肌肉在做运动的时候，局部的血液循环量在加大，血液循环量加大以后，局部的营养都会得到改善，这样可以远离一些肌肉的损伤，保证疲劳以后产生的酸性物质，通过加大循环以后都会消除。特别是伏案工作的人，可每天做上两分钟。
第四节：旱地划船 首先双脚叉开，两手前伸，挺胸塌腰向前。这个时候假设两手握住船桨，两手向后划。这个动作看似简单，但真正的技术要领，是在两手划来的时候，后背肌肉要使劲，向前伸时候放松，向后划时候用力，这节操可每天做1分钟，能有效解除后背疼痛。
第五节：大飞雁 首先向前迈出半步，重心开始移到前边这条腿上，两手侧平举，这是一个简单的动作，复杂的动作就是两个手向后飞起来，抬头看房顶，这个时候大家可以看到，整个的脊柱都参与运动了。这个动作左边做三十秒，右边也做三十秒，交替做，这个动作对后背有问题的人，有很好的缓解作用。
除了这五节操，顾主任还建议中老年及病人可以做这样一个动作，即将左手轻轻地搭在座位上，起一个保护作用，抬你的右侧上肢，右侧下肢，昂头，上肢和下肢都往后使劲，这样用力、放松，反复做，比较安全简单，也同样有很好的作用。 此外，做操时还有不少需要注意的细节。顾主任说，老年人最好别做诸如划圈等环绕动作，以免做了会出现头晕等不适症状。 在做这些动作的过程中，如果出现了疼痛，或者原先的症状越来越厉害，则应马上停止做操，去医院就医。
为大家推荐了以下简单易学的脊柱保健操：
第一节：隔墙看戏 首先踮起脚尖，立起脚后跟，躯干拉直，脖子伸长，下巴往上抬。这节操最大的特点就是用自己的肌肉把自己的后背整个的肌肉拉直，相当于把脊柱拉直，做自我牵引。每天只需做三分钟。
第二节：十点十分操 当两只手侧平举的时候，在表针上叫9∶15，这个时候各向上5个刻度，就变成了十点十分。每当手臂上来下去时，可摸一下自己颈部的肌肉，随着这个过程，支撑脖子的肌肉能得到有效的锻炼。注意手一定放在自己的两侧，往后张开。每天做1分钟。
第三节：头手对抗 两只手交叉着放在自己的枕后部，然后保持双眼平视前方，你的颈椎是自然正常的位置，你的手向前用力，头向后用力，这样用力、放松，一方面提高颈后肌肉的力量，一方面能促进颈后的血液循环，对颈椎是非常好的保健动作。可以缓解肌肉的疲劳，特别肌肉在做运动的时候，局部的血液循环量在加大，血液循环量加大以后，局部的营养都会得到改善，这样可以远离一些肌肉的损伤，保证疲劳以后产生的酸性物质，通过加大循环以后都会消除。特别是伏案工作的人，可每天做上两分钟。
第四节：旱地划船 首先双脚叉开，两手前伸，挺胸塌腰向前。这个时候假设两手握住船桨，两手向后划。这个动作看似简单，但真正的技术要领，是在两手划来的时候，后背肌肉要使劲，向前伸时候放松，向后划时候用力，这节操可每天做1分钟，能有效解除后背疼痛。
第五节：大飞雁 首先向前迈出半步，重心开始移到前边这条腿上，两手侧平举，这是一个简单的动作，复杂的动作就是两个手向后飞起来，抬头看房顶，这个时候大家可以看到，整个的脊柱都参与运动了。这个动作左边做三十秒，右边也做三十秒，交替做，这个动作对后背有问题的人，有很好的缓解作用。
除了这五节操，顾主任还建议中老年及病人可以做这样一个动作，即将左手轻轻地搭在座位上，起一个保护作用，抬你的右侧上肢，右侧下肢，昂头，上肢和下肢都往后使劲，这样用力、放松，反复做，比较安全简单，也同样有很好的作用。 此外，做操时还有不少需要注意的细节。顾主任说，老年人最好别做诸如划圈等环绕动作，以免做了会出现头晕等不适症状。 在做这些动作的过程中，如果出现了疼痛，或者原先的症状越来越厉害，则应马上停止做操，去医院就医。
ZA NiC免费二级域名
标签：
免费资源
ZA NiC免费二级域名，提供yourname.za.net和yourname.za.org形式的二级域名，支持DNS解析，注册前请到这里先查询一下域名是否已被注册，将要注册的域名添加到DNS解析服务器上（推荐使用EveryDNS免费DNS解析服务）然后开始注册域名。
whois查询：http://www.za.net/whois.html
注册地址：http://www.za.net/register.html
.....Complete domain name 填入你要注册的域名
Organisation
Organisation Name 组织名称（个人请填姓名）
Street Address 街道地址
City 城市
Post Code 邮编
Country 国家
Administrative contact
Name and Surname 姓名
E-Mail 电子邮箱
（注册完成后要收激活信，请填写真实的邮箱地址；ZA NiC不接受gmail和yahoo和邮箱的申请！）
Organisation 组织名称
Street Address 街道地址
City 城市
State or Province 州/省
Post Code 邮编
Country 国家
Phone Number 电话号码
Fax Number 传真号码
Technical Contact
Name and Surname 姓名
E-Mail 电子邮箱
（注册完成后要收激活信，请填写真实的邮箱地址；ZA NiC不接受gmail和yahoo和邮箱的申请！）
Organisation 组织名称
Street Address 街道地址
City 城市
State or Province 州/省
Post Code 邮编
Country 国家
Phone Number 电话号码
Fax Number 传真号码
Technical information 域名NS
Name1: IP1:
Name2: IP2:
Name3: IP3:
填写NS记录（域名DNS服务器地址）和对应的IP地址。
填写完成后点击“Submit”提交
whois查询：http://www.za.net/whois.html
注册地址：http://www.za.net/register.html
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Organisation
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填写NS记录（域名DNS服务器地址）和对应的IP地址。
填写完成后点击“Submit”提交
unblock-all德国的免费在线代理服务器
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免费资源
unblock-all德国的免费在线代理服务器，采用PHProxy在线代理系统程序，广告不多，但有弹窗广告。对中文网页支持不错，没有乱码。支持SSL，可以访问、https网站。网址：http://www.unblock-all.com在页面中下方地址栏中输入你要访问的网站网址，再点地址栏右面的“Go”按钮即可用unblock-all网页代理浏览到你想上的网站了！.....帖子的其余部分
LayeredPanel面板空间申请格式
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免费资源
LayeredPanel面板空间申请格式都是一个样的.自己看吧.
先进http://www.hostrator.com
这里值得注意的是.不要使用国内那些163.新浪.等等那些油箱.一定要用国外的.比如微软的.谷歌的.这里最推荐谷歌的邮箱.如果你想收到回信就使用谷歌的邮箱..什么都填写完后.你会收到他们的确认邮件.
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zoombrowse.com提供50G免费PHP空间
标签：
免费资源
地址:
http://www.zoombrowse.com
容量:
50GB
流量:
500G
广告:
没广告
上传:
ftp上传，网页上传
脚本:
CGI, PHP, SSI, FrontPage Server Extensions, Perl, Python
域名:
绑定自己的域名，送子域名
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ghs.google.com撞墙解决方案
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免费资源,
ghs.google.com解封
本页面是关于Google GHS解封被封以及解决办法的专帖。
ghs.google.com大部分时间下都是被GFW墙的，此时大家可以把CNAME记录由ghs.google.com换成"google.168369.com."
本站已经成功解析为http://mm.168369.com/
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2009年2月19日星期四
肺炎双球菌转化中 DNA的转化
在发现DNA的过程中，英国科学家格里菲斯用肺炎双球菌去感染小鼠，最后试验证明加入了S型细菌的DNA使R型细菌转变成了S型，而细菌又是属于分裂生殖（无性生殖），子体应该和母体完全一样，怎么会变成另一种细菌？而且DNA又是怎么进入的呢？
这里控制肺炎双球菌S型和R型的是质粒上的DNA，所以，进入细菌体内的是S型细菌的质粒，可能是通过内吞作用进入R型细菌体内的。而质粒DNA在经过复制和表达，使得R型双球菌出现夹膜，因而变为S型。
这里控制肺炎双球菌S型和R型的是质粒上的DNA，所以，进入细菌体内的是S型细菌的质粒，可能是通过内吞作用进入R型细菌体内的。而质粒DNA在经过复制和表达，使得R型双球菌出现夹膜，因而变为S型。
原核表达 真核表达
原核表达
将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：
易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象。
表达载体在基因工程中具有十分重要的作用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达载体应具有以下几种元件：
（1）选择标志的编码序列；
（2）可控转录的启动子；
（3）转录调控序列(转录终止子，核糖体结合位点)；
（4）一个多限制酶切位点接头；
（5）宿主体内自主复制的序列。
原核表达一般程序如下：
获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测
真核表达
异源蛋白质在细菌中表达是目前使用的主要的蛋白生产系统。大肠杆菌一直是最经济的系统之一。然而为了生产需要特异修饰、胞外分泌或有特异折叠需要的蛋白质，其他表达系统也是需要的。真核细胞在表达原核来源的基因、真核基因的cDNA拷贝或其他无内含子的基因时可能表现很多特异问题。富含AT的基因在很多真核细胞中表达时会遭遇很剧烈的障碍。主要的真核信号序列如 加poly-A的位点、酵母转录终止位点和真核mRNA去稳定序列都是富含AT的。内含子序列也趋向于富含AT，尽管他们有参与剪切过程的很特异的识别序列。虽然绝大多数原核基因没有剪切或聚腺苷过程，但这些真核过程需要的保守序列可能存在于原核基因中，因此当这些基因在真核细胞中表达时可能引起特异的问题。而且诸如哺乳动物和单子叶植物细胞的特异真核表达系统可能不能有效地表达无内含子的基因。
真核mRNA在离开细胞核进而在胞浆的核糖体上被翻译前需要特异的处理和修饰。这些过程包括去除内含子、5'端甲基化帽子形成和3'端加poly-A。内含子去除需要5'剪切位点、G75/G100U100A65AG65U保守序列、3'剪切位点、富含密啶NC66A100G100/G56保守序列和C72T98R77A100Y75保守序列。有效的加poly-A和mRNA剪切需要一个由两个部分组成的信号：加poly-A保守序列AAUAAA和在切割位点内的50个碱基的富含GT的序列。酵母真核转录终止序列（几个不同的富含AT序列,如含TTTTTATA，TATATA，TACATA，TAGTAGTA的一个38bp区域）被研究的最清楚。这些结果来自对酵母突变体CYCI mRNA的mRNA水平和相对长度的确定的实验。近期用in vivo质粒稳定性分析的研究结果证明：TATATA似乎和原始的38bp野生型区域一样有效地终止转录，而TAGATATATATGTAA和TACATA效率差些，TTTTTTTATA几乎没有效率。所有这些序列在反方向时没有终止转录功能。不幸的是几乎没有其他真核表达系统转录终止序列方面的信息。
内含子对几个哺乳动物基因的正常表达是必需的，包括Beta-球蛋白、SV40 late mRNA和二氢叶酸还原酶基因。单子叶植物细胞充分表达乙醇脱氢酶的cDNA拷贝、报告基因氯霉素乙酰转移酶、Beta葡萄糖苷酸酶和其他缺乏内含子的基因时也依赖内含子。转录区域内引入内含子可以通过未确定的转录后机制增强表达。（免疫球蛋白基因）内含子可能也包含转录增强子，因此通过转录机制增强表达。
将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：
易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象。
表达载体在基因工程中具有十分重要的作用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达载体应具有以下几种元件：
（1）选择标志的编码序列；
（2）可控转录的启动子；
（3）转录调控序列(转录终止子，核糖体结合位点)；
（4）一个多限制酶切位点接头；
（5）宿主体内自主复制的序列。
原核表达一般程序如下：
获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测
真核表达
异源蛋白质在细菌中表达是目前使用的主要的蛋白生产系统。大肠杆菌一直是最经济的系统之一。然而为了生产需要特异修饰、胞外分泌或有特异折叠需要的蛋白质，其他表达系统也是需要的。真核细胞在表达原核来源的基因、真核基因的cDNA拷贝或其他无内含子的基因时可能表现很多特异问题。富含AT的基因在很多真核细胞中表达时会遭遇很剧烈的障碍。主要的真核信号序列如 加poly-A的位点、酵母转录终止位点和真核mRNA去稳定序列都是富含AT的。内含子序列也趋向于富含AT，尽管他们有参与剪切过程的很特异的识别序列。虽然绝大多数原核基因没有剪切或聚腺苷过程，但这些真核过程需要的保守序列可能存在于原核基因中，因此当这些基因在真核细胞中表达时可能引起特异的问题。而且诸如哺乳动物和单子叶植物细胞的特异真核表达系统可能不能有效地表达无内含子的基因。
真核mRNA在离开细胞核进而在胞浆的核糖体上被翻译前需要特异的处理和修饰。这些过程包括去除内含子、5'端甲基化帽子形成和3'端加poly-A。内含子去除需要5'剪切位点、G75/G100U100A65AG65U保守序列、3'剪切位点、富含密啶NC66A100G100/G56保守序列和C72T98R77A100Y75保守序列。有效的加poly-A和mRNA剪切需要一个由两个部分组成的信号：加poly-A保守序列AAUAAA和在切割位点内的50个碱基的富含GT的序列。酵母真核转录终止序列（几个不同的富含AT序列,如含TTTTTATA，TATATA，TACATA，TAGTAGTA的一个38bp区域）被研究的最清楚。这些结果来自对酵母突变体CYCI mRNA的mRNA水平和相对长度的确定的实验。近期用in vivo质粒稳定性分析的研究结果证明：TATATA似乎和原始的38bp野生型区域一样有效地终止转录，而TAGATATATATGTAA和TACATA效率差些，TTTTTTTATA几乎没有效率。所有这些序列在反方向时没有终止转录功能。不幸的是几乎没有其他真核表达系统转录终止序列方面的信息。
内含子对几个哺乳动物基因的正常表达是必需的，包括Beta-球蛋白、SV40 late mRNA和二氢叶酸还原酶基因。单子叶植物细胞充分表达乙醇脱氢酶的cDNA拷贝、报告基因氯霉素乙酰转移酶、Beta葡萄糖苷酸酶和其他缺乏内含子的基因时也依赖内含子。转录区域内引入内含子可以通过未确定的转录后机制增强表达。（免疫球蛋白基因）内含子可能也包含转录增强子，因此通过转录机制增强表达。
DNA 连接
标签：
生物习题
DNA分子的体外连接就是在一定条件下， 由DNA连接酶催化两个双链DNA片段组邻的5’端磷酸与3’端羟基之间形成磷酸酸脂键的生物化学过程， DNA分子的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列基础上进行的。
带有相同末端(平端或粘端)的外源DNA必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中,但是在连接反应时,外源DNA和质粒都可能发生环化,也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接反应中两个DNA 的浓度，以便使“正确”连接产物的数量达到最佳水平，此外还常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用T4 DNA连接酶进行目的DNA和载体的体外连接反应，也就是在双链DNA 5’磷酸和相邻的3’羟基之间形成新的共价键。如载体的两条链都带有5’磷酸（未脱磷），可形成4个新的磷酸二酯键；如载体DNA已脱磷，则只能形成2个新的磷酸二酯键，此时产生的重组DNA带有两个单链缺口，在导入感受态细胞后可被修复。
1、 不对称粘性末端：两种限制酶消化后，需纯化载体以提高连接效率；载体与外源DNA连接处的限制酶切位点常可保留；非重组克隆的背景较低；外源DNA可以定向插入到载体中。
2、 对称性粘性末端；线形载体DNA常需磷酸酶脱磷处理；载体与外源DNA连接处的限制酶切位点常可保留；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；外源DNA会以两个方向插入到载体中。
3、 平端：要求高浓度的DNA和连接酶；载体与外源DNA连接处的限制酶切位点消失；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；非重组克隆的背景较高 。
粘性末端连接：
实验试剂：
用适当的限制酶消化质粒和外源DNA。如有必要，可用凝胶电泳分离片段并（或）用碱性磷酸酶处理质粒DNA。通过酚：氯仿抽提和乙沉淀来纯化DNA，然后用TE(pH7.6)溶液使其浓度为100/ml。
10×T4DNA连接酶buffer（该缓冲液应分装成小份，贮存于－20℃。）：200mMTris-HCl(pH7.6)；50mMMgCl2；50mM二硫苄糖醇；
500μl/ml BSA（可用可不用）
T4DNA连接酶
5mM ATP
实验步骤：
1、 在无菌Eppendorf管中加入以下溶液：
1) 10μl体积反应体系中：取载体50-100ng，加入一定比例的外源DNA 分子（一般线性载体DNA分子与外源DNA分子摩尔数为1∶1-1∶5），补足ddH2O 至8μl。
2) 轻轻混匀，稍加离心，于45℃水浴5分钟使重新退火的粘端解链， 迅速将混合物转入冰浴。
3) 加入含ATP的10×Buffer 1μl，T4 DNA连接酶合适单位， 用ddH2O 补至10μl。
2、 盖上管盖，充分混匀，台式离心扣上离心5秒。
3、 12℃下过夜连接反应。
4、 反应结束后于－20℃保存。
5、 再设立两个对照反应，其中含有（1）只有质粒载体；（2）只有外源DNA片段。如果外源DNA量不足，每个连接反应可用50-100ng质粒DNA，并尽可能多加外源DNA，同时保持连接反应体积不超过10μl。可用至少3种不同方法来测定T4噬菌体DNA连接酶的活性。
注意事项：
1、 连接反应的温度：DNA连接酶的最适反应温度为37℃，但在此温度下， 粘性末端的氢键结合很不稳定，折衷方法是12℃过夜。
2、 DNA的平未端和粘性末端：由于内切酶产生的DNA末端有平未端和粘性末端，因而连接反应中就有平未端连接和粘性末端连接。 二者连接效率不同。粘性末端效率高，因而在底物浓度，酶浓度选择上是有差异的。
3、 碱性磷酸酶处理质粒载体：为了提高连接效率，一般采取提高DNA的浓度，增加重组子比例。这样就会出现DNA自生连接问题， 为此通常选择对质粒载体用碱性磷酸酶处理，除去其5’末端的磷酸基，防止环化， 通过接反应后形成的缺口可在转化细胞后得以修复。
4、 连接反应的检测：连接反应成功与否，最后的检测要通过下一步实验，转化宿主菌， 阳性克隆的筛选来确定。
5、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效，可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功，则说明有效。
带有相同末端(平端或粘端)的外源DNA必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中,但是在连接反应时,外源DNA和质粒都可能发生环化,也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接反应中两个DNA 的浓度，以便使“正确”连接产物的数量达到最佳水平，此外还常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用T4 DNA连接酶进行目的DNA和载体的体外连接反应，也就是在双链DNA 5’磷酸和相邻的3’羟基之间形成新的共价键。如载体的两条链都带有5’磷酸（未脱磷），可形成4个新的磷酸二酯键；如载体DNA已脱磷，则只能形成2个新的磷酸二酯键，此时产生的重组DNA带有两个单链缺口，在导入感受态细胞后可被修复。
1、 不对称粘性末端：两种限制酶消化后，需纯化载体以提高连接效率；载体与外源DNA连接处的限制酶切位点常可保留；非重组克隆的背景较低；外源DNA可以定向插入到载体中。
2、 对称性粘性末端；线形载体DNA常需磷酸酶脱磷处理；载体与外源DNA连接处的限制酶切位点常可保留；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；外源DNA会以两个方向插入到载体中。
3、 平端：要求高浓度的DNA和连接酶；载体与外源DNA连接处的限制酶切位点消失；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；非重组克隆的背景较高 。
粘性末端连接：
实验试剂：
用适当的限制酶消化质粒和外源DNA。如有必要，可用凝胶电泳分离片段并（或）用碱性磷酸酶处理质粒DNA。通过酚：氯仿抽提和乙沉淀来纯化DNA，然后用TE(pH7.6)溶液使其浓度为100/ml。
10×T4DNA连接酶buffer（该缓冲液应分装成小份，贮存于－20℃。）：200mMTris-HCl(pH7.6)；50mMMgCl2；50mM二硫苄糖醇；
500μl/ml BSA（可用可不用）
T4DNA连接酶
5mM ATP
实验步骤：
1、 在无菌Eppendorf管中加入以下溶液：
1) 10μl体积反应体系中：取载体50-100ng，加入一定比例的外源DNA 分子（一般线性载体DNA分子与外源DNA分子摩尔数为1∶1-1∶5），补足ddH2O 至8μl。
2) 轻轻混匀，稍加离心，于45℃水浴5分钟使重新退火的粘端解链， 迅速将混合物转入冰浴。
3) 加入含ATP的10×Buffer 1μl，T4 DNA连接酶合适单位， 用ddH2O 补至10μl。
2、 盖上管盖，充分混匀，台式离心扣上离心5秒。
3、 12℃下过夜连接反应。
4、 反应结束后于－20℃保存。
5、 再设立两个对照反应，其中含有（1）只有质粒载体；（2）只有外源DNA片段。如果外源DNA量不足，每个连接反应可用50-100ng质粒DNA，并尽可能多加外源DNA，同时保持连接反应体积不超过10μl。可用至少3种不同方法来测定T4噬菌体DNA连接酶的活性。
注意事项：
1、 连接反应的温度：DNA连接酶的最适反应温度为37℃，但在此温度下， 粘性末端的氢键结合很不稳定，折衷方法是12℃过夜。
2、 DNA的平未端和粘性末端：由于内切酶产生的DNA末端有平未端和粘性末端，因而连接反应中就有平未端连接和粘性末端连接。 二者连接效率不同。粘性末端效率高，因而在底物浓度，酶浓度选择上是有差异的。
3、 碱性磷酸酶处理质粒载体：为了提高连接效率，一般采取提高DNA的浓度，增加重组子比例。这样就会出现DNA自生连接问题， 为此通常选择对质粒载体用碱性磷酸酶处理，除去其5’末端的磷酸基，防止环化， 通过接反应后形成的缺口可在转化细胞后得以修复。
4、 连接反应的检测：连接反应成功与否，最后的检测要通过下一步实验，转化宿主菌， 阳性克隆的筛选来确定。
5、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效，可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功，则说明有效。
DNA 纯化
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生物习题
在生物技术实验中，我们粗提取的DNA需分离纯化去处蛋白质等杂质，我们都需要将最终的结果在琼脂糖凝胶， 或PAGE凝胶上走电泳观察，以判断我们实验的正确性以及DNA片段的完整性。同时通过紫外分光光度计测定OD260,OD280的吸收值，以确定DNA的浓度和纯度。
核酸经凝胶电泳后，在EB（溴化乙锭）中浸染，核酸分子与溴化乙锭结合后， 能吸收300-360mm波长的紫外光，同时诱发出液长为590nm的红橙色荧光，从而可通过照像机摄影，凝胶成像系统记录实验结果。DNA浓度的计算根据郎伯-比尔定理（E=abc）计算。根据经验1OD260=0.05ug/ul DNA。DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。
实验试剂及器材
酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）
70％乙醇 TE buffer
RNase
琼脂糖
TBE电泳缓冲液
电泳设备
紫外分光光度计
凝胶成像系统
1. 加入RNase至终浓度10μg/ul 37℃反应1小时。
2. 加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）等体积各抽提2-3次，取上清。
3. 加入1/10倍体积3M NaAc(pH5.2)，2倍体积无水乙醇混匀，－20℃下10min-30min。
4. 15000rpm，离心10分钟。
5. DNA沉淀用 70％乙醇洗2次， 37℃烘干DNA（无乙醇）。
6. 100μl TE buffer溶解沉淀
7 取20ul DNA母液稀释至1000μl，在紫外分光光度计上测OD260,OD280。
8. 取10 ul DNA, 在 0.8％琼脂糖凝胶120伏，1-2小时电泳，
9. 在凝胶成像系统上记录和分析结果。
核酸经凝胶电泳后，在EB（溴化乙锭）中浸染，核酸分子与溴化乙锭结合后， 能吸收300-360mm波长的紫外光，同时诱发出液长为590nm的红橙色荧光，从而可通过照像机摄影，凝胶成像系统记录实验结果。DNA浓度的计算根据郎伯-比尔定理（E=abc）计算。根据经验1OD260=0.05ug/ul DNA。DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。
实验试剂及器材
酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）
70％乙醇 TE buffer
RNase
琼脂糖
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1. 加入RNase至终浓度10μg/ul 37℃反应1小时。
2. 加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）等体积各抽提2-3次，取上清。
3. 加入1/10倍体积3M NaAc(pH5.2)，2倍体积无水乙醇混匀，－20℃下10min-30min。
4. 15000rpm，离心10分钟。
5. DNA沉淀用 70％乙醇洗2次， 37℃烘干DNA（无乙醇）。
6. 100μl TE buffer溶解沉淀
7 取20ul DNA母液稀释至1000μl，在紫外分光光度计上测OD260,OD280。
8. 取10 ul DNA, 在 0.8％琼脂糖凝胶120伏，1-2小时电泳，
9. 在凝胶成像系统上记录和分析结果。
2009年2月18日星期三
湿度计
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生物习题
湿度计是用来测量物体的湿度的。
1 ．湿度计的构成：湿度计由两只完全相同的温度计构成．其中一只温度计为干泡温度计，另一只为湿泡温度计．
2 ．湿度计测量完全相对湿度的原理：由于湿泡温度计的感温泡包着棉纱，棉纱的下端浸在水中，水的蒸发而使湿泡温 度计的温度示数总是低于干泡温度计的温度示数（气温）这一温度差值跟水蒸发快慢（即当时的相对湿度）有关．根据两温度计的读数，从表或曲线上可查出空气的相对湿度．
一、空气的湿度
空气的湿度可通俗地理解为空气的潮湿程度．它有绝对湿度和相对湿度之分．
1 ．绝对湿度：空气中水蒸气的压强 p 叫做空气的绝对湿度．
空气的湿度可以用空气中所含水蒸汽的密度，即单位体积的空气中所含水蒸汽的质量来表示．由于直接测量空气中水蒸气的密度比较困难，而水蒸气的压强随水蒸气密度的增大而增大，所以通常用空气中水蒸气的压强来表示空气的湿度，这就是空气的绝对湿度．
2 ．相对湿度
（ 1 ）概念的引入：为了表示空气中水蒸气离饱和状态的远近而引入相对湿度的概念．
（ 2 ）相对湿度 B ：某温度时空气的绝对湿度 p 跟同一温度下水的饱和汽压 ps 的百分比叫做这时空气的相对湿度
①不同温度下水的饱和汽压可以查表得到
②在绝对湿度 p 不变而降低温度时，由于水的饱和汽压减小而使空气的相对湿度增大．
③居室的相对湿度以 60 ％～ 70 ％较适宜．
1 ．湿度计的构成：湿度计由两只完全相同的温度计构成．其中一只温度计为干泡温度计，另一只为湿泡温度计．
2 ．湿度计测量完全相对湿度的原理：由于湿泡温度计的感温泡包着棉纱，棉纱的下端浸在水中，水的蒸发而使湿泡温 度计的温度示数总是低于干泡温度计的温度示数（气温）这一温度差值跟水蒸发快慢（即当时的相对湿度）有关．根据两温度计的读数，从表或曲线上可查出空气的相对湿度．
一、空气的湿度
空气的湿度可通俗地理解为空气的潮湿程度．它有绝对湿度和相对湿度之分．
1 ．绝对湿度：空气中水蒸气的压强 p 叫做空气的绝对湿度．
空气的湿度可以用空气中所含水蒸汽的密度，即单位体积的空气中所含水蒸汽的质量来表示．由于直接测量空气中水蒸气的密度比较困难，而水蒸气的压强随水蒸气密度的增大而增大，所以通常用空气中水蒸气的压强来表示空气的湿度，这就是空气的绝对湿度．
2 ．相对湿度
（ 1 ）概念的引入：为了表示空气中水蒸气离饱和状态的远近而引入相对湿度的概念．
（ 2 ）相对湿度 B ：某温度时空气的绝对湿度 p 跟同一温度下水的饱和汽压 ps 的百分比叫做这时空气的相对湿度
①不同温度下水的饱和汽压可以查表得到
②在绝对湿度 p 不变而降低温度时，由于水的饱和汽压减小而使空气的相对湿度增大．
③居室的相对湿度以 60 ％～ 70 ％较适宜．
关于参加2009年全国中学生生物学联赛《陕西赛区》预赛的通知
各高中学：
为了加强中学生物学教学，提高生物学教学水平；促进高中课改向个性化发展与促进中学生物学课外活动；向青少年普及生物科学知识、提高他们的生命科学素质。根据省、市竞赛委员会的竞赛精神要求，现将2009年碑林区预赛工作的有关事项通知如下：
一、考试与报名时间
1、全省预赛定于2009年3月29日(周日)上午9时—12时；分A、B卷考试 A卷9：00-10：30；B卷11：00-12：00；中间休息半小时。
2、全区统一于3月2日（周一）仅一天报名。
3、全国联赛(省级复赛)时间：另行通知。
二、考试范围
试题内容以中学生物学教材为基础，并适当扩展一些大学教材，试题难度，低于全国联赛，贴近高考。试题范围初中教材20％，高中教材60％，大学教材20％。
三、报名与收费
1、报名：由学校组织学生自愿参加，由学校认真填写报名册，以电子邮件从网上上报区教研室电子表格一份，（邮箱： blzhongjiao@126.com）到区教研室交打印文字稿两份,领取准考证。碑林区起始号为0001 0002 以此类推。
2、收费：凡报名学生每人收参赛费14元（A、B试卷两次考试）。
3、联系人： 陈老师 联系电话：81011059 81022921
四、奖励办法
1、学生奖励分一、二、三等奖，获奖学生的辅导老师也有个人获奖证书。
2、省级竞赛还设有优秀组织奖和团体优胜奖，若团体优胜居前六名，可获团体总分前六名的奖励。
注：1、报名前请电话联系各校报名顺序号。
2、遵照省竞赛委员会要求不接受各校后续报名和家长，尽请谅解。
3、附预赛报名册一份。
附：2009年陕西省中学生生物学竞赛预赛报名册
碑林区教师进修学校
2009年2月18日
为了加强中学生物学教学，提高生物学教学水平；促进高中课改向个性化发展与促进中学生物学课外活动；向青少年普及生物科学知识、提高他们的生命科学素质。根据省、市竞赛委员会的竞赛精神要求，现将2009年碑林区预赛工作的有关事项通知如下：
一、考试与报名时间
1、全省预赛定于2009年3月29日(周日)上午9时—12时；分A、B卷考试 A卷9：00-10：30；B卷11：00-12：00；中间休息半小时。
2、全区统一于3月2日（周一）仅一天报名。
3、全国联赛(省级复赛)时间：另行通知。
二、考试范围
试题内容以中学生物学教材为基础，并适当扩展一些大学教材，试题难度，低于全国联赛，贴近高考。试题范围初中教材20％，高中教材60％，大学教材20％。
三、报名与收费
1、报名：由学校组织学生自愿参加，由学校认真填写报名册，以电子邮件从网上上报区教研室电子表格一份，（邮箱： blzhongjiao@126.com）到区教研室交打印文字稿两份,领取准考证。碑林区起始号为0001 0002 以此类推。
2、收费：凡报名学生每人收参赛费14元（A、B试卷两次考试）。
3、联系人： 陈老师 联系电话：81011059 81022921
四、奖励办法
1、学生奖励分一、二、三等奖，获奖学生的辅导老师也有个人获奖证书。
2、省级竞赛还设有优秀组织奖和团体优胜奖，若团体优胜居前六名，可获团体总分前六名的奖励。
注：1、报名前请电话联系各校报名顺序号。
2、遵照省竞赛委员会要求不接受各校后续报名和家长，尽请谅解。
3、附预赛报名册一份。
附：2009年陕西省中学生生物学竞赛预赛报名册
碑林区教师进修学校
2009年2月18日
省钱! 10个免费发短信的国外站点
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免费资源
如今国内的用户对于手机资费的抱怨还是一直存在的，且不说双向收费这样的老大难问题，单就通话或短信的资费来讲我们的标准也都存在普遍较高的问题，虽然国家已经多次召开资费标准听证会，而我们也确实见到了一些下调，不过进度仍旧是缓慢的，这时就有了一种省钱的新模式，那就是通过互联网来向手机端发送免费短信，虽然可能会有些麻烦，但它的实际意义还是有的，毕竟我们节省了自己的花费，下面我们就为大家介绍10个来自国外的优秀免费发送短信的站点，一起来看看吧！
1、Bloove.com 可以将你的手机内的联系人上传到站里，登陆之后就可以直接准确的将短信息发送到他们的手机上，非常方便快捷。
2、ClearSMS.com 一个专业级的商用信息收发以及大规模群发的站点，它可以为你的用户提供不同的受到讯息提示，另外也可以通过付费来享受到更多的信息定制服务。
3、GizmoSMS.com GizmoSMS可以让你免费自如的像全世界超过50个国家的用户发送免费短信，只是它并不能发送彩信，和其他任何多媒体消息，当然免费的我们还有什么可以挑剔的呢。 4、Group2Call.com 支持导入你的本地联系人名单，然后可以以你自己设定好的群组进行免费短信群发，另外值得高兴的是它支持将声音文件一同发出，这是许多免费服务所没有的。 5、Jaxtr.com 这个有点像一个当今流行的桌面“微件”，虽然看起来小，但是他也同样能够满足我们的免费短信需要，支持超过38个国家间的免费短信发送。
6、OhDontForget.com 这个站与其他的站功能基本相同，不过它的亮点在于可以设定信息发送的时间，用来有特定需要的发送。
7、SMSGupShup.com 一个非常强大的信息发送站点，支持向最多5000人群发短信，不知道这里会不会成为垃圾短信的源头...当然我们一般人也很难有5000个联系人。
8、Swaggle.mobi 目前支持iPhone做好的免费短信发送站，支持iPhone上的联系人名单，并可以按组群发。
9、Yahoo Mobile Yahoo推出的免费信息发送服务，当然它也不单单有这一项业务，而且是免费于收费并存的模式，不过对于它功能的强大与否是我们完全可以放心的。
10、Yellowpipe 基于网页的一个免费短信与网络电话相结合的站点，我们除了可以发送短信之外还可以拨打通信录上的电话，并且方便的进行免费回拨。
1、Bloove.com 可以将你的手机内的联系人上传到站里，登陆之后就可以直接准确的将短信息发送到他们的手机上，非常方便快捷。
2、ClearSMS.com 一个专业级的商用信息收发以及大规模群发的站点，它可以为你的用户提供不同的受到讯息提示，另外也可以通过付费来享受到更多的信息定制服务。
3、GizmoSMS.com GizmoSMS可以让你免费自如的像全世界超过50个国家的用户发送免费短信，只是它并不能发送彩信，和其他任何多媒体消息，当然免费的我们还有什么可以挑剔的呢。 4、Group2Call.com 支持导入你的本地联系人名单，然后可以以你自己设定好的群组进行免费短信群发，另外值得高兴的是它支持将声音文件一同发出，这是许多免费服务所没有的。 5、Jaxtr.com 这个有点像一个当今流行的桌面“微件”，虽然看起来小，但是他也同样能够满足我们的免费短信需要，支持超过38个国家间的免费短信发送。
6、OhDontForget.com 这个站与其他的站功能基本相同，不过它的亮点在于可以设定信息发送的时间，用来有特定需要的发送。
7、SMSGupShup.com 一个非常强大的信息发送站点，支持向最多5000人群发短信，不知道这里会不会成为垃圾短信的源头...当然我们一般人也很难有5000个联系人。
8、Swaggle.mobi 目前支持iPhone做好的免费短信发送站，支持iPhone上的联系人名单，并可以按组群发。
9、Yahoo Mobile Yahoo推出的免费信息发送服务，当然它也不单单有这一项业务，而且是免费于收费并存的模式，不过对于它功能的强大与否是我们完全可以放心的。
10、Yellowpipe 基于网页的一个免费短信与网络电话相结合的站点，我们除了可以发送短信之外还可以拨打通信录上的电话，并且方便的进行免费回拨。
2009年2月17日星期二
基因枪法 gene gun bombardment
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生物习题
基因枪法
该法又称粒子轰击(particle bombardment)，高速粒子喷射技术(High-velocity particle microprojection)或基因枪轰击技术(gene gun bombardment)，是由美国Comel大学生物化学系John.C.Santord等于1983年研究成功。并在1987年，Vlein首先报道了应用此技术将TMV（烟草花叶病毒）RNA吸附到钨粒表面，轰击洋葱表皮细胞，经检测发现病毒RNA能进行复制，并以同样技术将CAT(Chloraphericol acetyltransferase氯霉素乙酰转移酶基因)基因导入洋葱表皮细胞。现在，该技术已在烟草、水稻、小麦、黑麦草、甘蔗、棉花、大豆、菜豆、洋葱、番木瓜、甜橙、葡萄等多种作物上成功。
这一方法是依靠一种基因枪来帮助导入外源基因。基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。其基本原理是通过动力系统将带有基因的金属颗粒（金粒或钨粒），将DNA吸附在表面，以一定的速度射进植物细胞，由于小颗粒穿透力强，故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组，从而实现稳定转化的目的。它具有应用面广，方法简单，转化时间短，转化频率高，实验费用低等优点。对于农杆菌不能感染的植物，采用该方法可打破载体法的局限。基因枪的转化频率与受体种类、微弹大小、轰击压力、制止盘与金颗粒的距离、受体预处理、受体轰击后培养有直接关系。
基因枪法： 将直径4um的钨粉或金粉在供体DNA中浸泡，然后用基因枪将这些粒子打入细胞、组织或器官中，具有一次处理多个细胞的优点，但转化效率较低，另外这种方法也用于基因治疗和抗体制备，并已取得初步成效。
该法又称粒子轰击(particle bombardment)，高速粒子喷射技术(High-velocity particle microprojection)或基因枪轰击技术(gene gun bombardment)，是由美国Comel大学生物化学系John.C.Santord等于1983年研究成功。并在1987年，Vlein首先报道了应用此技术将TMV（烟草花叶病毒）RNA吸附到钨粒表面，轰击洋葱表皮细胞，经检测发现病毒RNA能进行复制，并以同样技术将CAT(Chloraphericol acetyltransferase氯霉素乙酰转移酶基因)基因导入洋葱表皮细胞。现在，该技术已在烟草、水稻、小麦、黑麦草、甘蔗、棉花、大豆、菜豆、洋葱、番木瓜、甜橙、葡萄等多种作物上成功。
这一方法是依靠一种基因枪来帮助导入外源基因。基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。其基本原理是通过动力系统将带有基因的金属颗粒（金粒或钨粒），将DNA吸附在表面，以一定的速度射进植物细胞，由于小颗粒穿透力强，故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组，从而实现稳定转化的目的。它具有应用面广，方法简单，转化时间短，转化频率高，实验费用低等优点。对于农杆菌不能感染的植物，采用该方法可打破载体法的局限。基因枪的转化频率与受体种类、微弹大小、轰击压力、制止盘与金颗粒的距离、受体预处理、受体轰击后培养有直接关系。
基因枪法： 将直径4um的钨粉或金粉在供体DNA中浸泡，然后用基因枪将这些粒子打入细胞、组织或器官中，具有一次处理多个细胞的优点，但转化效率较低，另外这种方法也用于基因治疗和抗体制备，并已取得初步成效。
2008年江苏高考生物第32题释疑
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生物习题
（08江苏生物32题）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
请根据以上图表回答下列问题。
（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是 。
（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。
（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？ 。
（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为 。
（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
[答案]（1）耐高温 （2）引物对B （3）否 （4）农杆菌 （5）①2 ②1
[疑难1]第（2）小题答案，引物对为何是B？
[解析]由于DNA分子中，G与C之间形成3个氢键，A与T之间只形成2个氢键，所以含G、C较多的DNA分子热稳定性较高。因为题目有“可采用较高的退火温度”的要求，符合条件的引物对中必须G、C含量较多，所以答案是B不是A。
[疑难2]第（5）小题答案如何得出？
[解析]根据图1和表2，我们可以看出，重组质粒T从原来的载体质粒上得到了一个PstⅠ识别位点；载体质粒和抗原基因片段被EcoRⅠ切割后形成了相同的黏性末端，两者重组时黏性末端互补配对形成了一个新的EcoRⅠ位点；载体质粒被SmaⅠ切割后，SmaⅠ的识别位点已不复存在。这样就可以判断出重组质粒T上有一个EcoRⅠ识别位点和一个PstⅠ识别位点，但是没有SmaⅠ的识别位点。所以，在所用的酶均可将识别位点完全切开的条件下，采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切重组质粒T，可以得到2种DNA片断；采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒T，只能得到1种DNA片断。
2009年2月16日星期一
UCOMO - 5G存储空间完全可外链免费网盘
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UCOMO是来自上海的一家新锐免费网络硬盘服务网站，Free8这里访问速度不错，提供5G存储空间，可上传图片、音乐、视频等各类文件，完全支持外链，可以在线播放音乐MP3和视频，非常实用，能够将图片、MP3音乐、视频嵌入到你的博客、网站、网店中。UCOMO提供了软件客户端，支持断点续传，另外还有WAP版，方便手机上传下载文件。
网址：http://www.ucomo.com/
UCOMO支持上传的图片相片格式为：jpg、jpeg、bmp、gif、png。UCOMO支持上传的音频格式为：mp3、wav、wmv、ra。UCOMO支持上传的视频格式为：rmvb、avi、asf、mpeg、mov、wmv、flv、mpg、rm。其它任何格式的文件都可以通过“文件上传”方式保存在UCOMO。
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Google旗下2G存储空间可外链免费相册
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Panoramio是来自西班牙的一家免费网络相册服务商，于2007年被Google收购。Panoramio为每个用户提供2G容量的存储空间，可以上传单个文件不超过5M大小的JPG图片，图片可以外链，具有包括简体中文在内的多语言版本。由于Panoramio的服务器现在都是由Google提供的，国内访问速度还是不错。Panoramio最大的特色就是可以和Google Earth很好的结合，你上传的风景照片可以定位到Google Earth中，其他用户浏览到Google Earth中的这个位置即可看到你的照片！
网址：http://www.panoramio.com
网址：http://www.panoramio.com
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2009年2月15日星期日
你会完全用你QQ吗
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1.号码被盗后，如何恢复以前的好友名单. 以前的号码假设为AA，申请一个新的QQ号码，假设BB号。打开QQ目录，在以AA号码命名的文件夹中找到user.db文件,然后覆盖粘贴至BB号码所在的文件夹中(复制前先备份此文件);使用BB号码登陆,所有AA以前的好友都在好友列表里面了,但是显示离线状态,把好友拖至陌生人组(按住shift全选名单或者ctrl+a),然后再在陌生人组里,把好友再拖进好友组中,退出,登陆后就会发现以前的好友又回来了.
2.如何让QQ昵称和自动回复与众不同. 在昵称和自动回复中添加QQ支持的表情图标快捷键即可打造个性昵称和回复消息.如加入太阳的表情图标,即可写入\"/ty\",这些表情图标所对应的快捷键可单击QQ聊天窗口的表情下拉框,在每个图标上用鼠标停留一会即可显示对应的快捷键文字.
3.强制聊天 如出于特殊原因，必须向一个非好友的QQ用户发送消息时，可用一段强制聊天代码实现，在浏览器中输入以下这段代码：HTTP：//WPA.QQ.COM/MSGRD?V=1&UIN=******&SITE=IOSHENMUE&MENU=YES,随后将代码中的星号 换成需联系用户的QQ号码并在浏览器中打开该地址即可.这样无论对方是否为QQ好友,均可直接发送消息.执行上述操作时最好开一个QQ号.如果开两个以上的QQ,则会出现对话框让用户选择使用QQ号码与对方聊天.
4.隐藏摄像头. 如果安了摄象头又不想让系统自动出现,可以隐藏摄象头,进入\"个人设置-系统设置-本地安全\"选项卡,在\"状态显示\"中,勾选\"不要将我列在在线视频用户的列表中\"一项即可.同样,勾选\"游戏状态不可见\"和\"聊天室状态不可见\"两项,就可隐藏自己的游戏和聊天室里的活动行踪.
5.禁止上线自动提示. 单击QQ面板的\"菜单\"的\"个人设置\"子菜单的\"系统设置\",单击\"基本设置\",将状态显示栏中的\"禁止所有用户上线提示\",点击确定即可.
6.从对方好友名单中消失. 如果要将自己从对方的好友名单中消失,但又需要对方保留在自己的好友名单中,要求对方删除自己的想法绝对不妥,但可借助QQ商务版本TM来实现神秘\"蒸发\",直接用TM登陆,在好友列表中找到对方,在其头像上单击右键, 选择\"将自己从对方联系人名单中删除\",最后在随后出现的警告对话框中进行确定即可,再登陆QQ,就行了.
7.揪出隐身好友. 隐身是QQ一项独特功能,虽然灰暗的图标免受了不少打拢,可用户仍有几种方法可找出隐身好友,下面只介绍一种:发送一个语音视频聊天请求,或发送某个文件给好友,如对方确实在线的话,会有以下几种处理方式,A:\"接收\"或\"拒绝\".此时窗口中会弹出相应的提示,即可确定对方处于隐身状态.B:直接关闭.对方即不接受也不拒绝,而直接将弹出窗口关闭,那么窗口同样会有对方拒绝的提示,同样可确定对方隐身.C:最小化弹出窗口,此时窗口无任何提示,无法确定对方隐身状态,但该方式下,对方的QQ会一直开着邀请窗口并占用资源.D:直接下线.对方不关闭弹出窗口而直接下线,此后再关闭弹出窗口,由于已下线,因此任何举动不会被传送,随后再隐身上线即可,这是对付试探隐身的最好办法。
8.自动找出不聊天好友.目前的QQ版本允许添加500个好友,当人满为患的时候即需删除一些好友,而删除的衡量标准往往是添加后几乎没有聊天的好友,其实使用一个简单的批处理命令即可迅速查出哪些好友没有聊天,随后可将其逐个删除.首先将QQ的聊天记录导出为myinfo.txt文件,随后编写一个批处理文件,内容如下 :findstr\"消息对象为:\"myinfo.txt>myfr.txt 然后将该批处理文件和myinfo.txt放在同一目录中,运行该批处理文件.此生会生成一个myfr.txt文件,文件中包含所有聊天的好友列表,随后只需通过查找方式来对照列表,将没有聊天的好友删除即可.
9.在QQ中看网络电视. 这属于QQ的隐藏功能，登陆QQ（2005beta3），单击QQ侧边栏的“用户自定义面板”。然后，单击“收藏夹”中的“设置”选项，弹出一个收藏列表框，可看到“Q_Radio”选项，勾选该选项就可以进行网络收音机。随后，添加一个“Q_TV”，链接地址输入“http://www.qq-tv.com”，并勾选即可。
10.巧护聊天记录. QQ的聊天记录也是一种不亚于密码的绝对隐私，保护聊天记录等本地信息，可以通过设置本地消息口令来实现。首先在QQ界面上选择“系统参数”，在“系统参数”视察选择“安全设置”标签，随后选择“启用本地消息加密”，再依次输入口令并确认口令即可。此外，为保险起见，建议勾选“启用本地消息加密口令提示”，设定提示问题和问题答案，按下“确定”使设定生效。此后在启动QQ输入账号和密码后，软件还会要求输入本地消息口令，否则无法登陆。
11.快速定位好友. 目前不少网友的QQ列表中有上百个好友，如何从长串列表中快速找到某个好友呢？很简单，在好友列表中，按下好友昵称的首字母即可快速定位，如“alan”的首个字母是“a”，“猛张飞”的拼音是“meng”，首个字母就是“M”，直接就能快速找到了。
12.改变地理位置 目前不少QQ版本（如珊瑚虫版）都有显示IP和地理位置的功能，很容易暴露网友的隐私。不过只需使用代理服务器，即可改变自己的地理位置。首先搜索到可用的代理服务器地址，在QQ中选择“个人设置-系统设置-代理设置”选项，选择“使用自定义的网络设置”，类型按代理服务器属性进行设置，如代理服务器属性为“sock5”，那么选择“sock5代理服务器”，在服务器一栏中并填入IP地址端口、用户名和密码等信息即可。
13.安全防范 在公共场所（如网吧）使用QQ必须得小心，以防别人盗号，现在的黑客、木马太多了。不过也有几条妙计可帮助你较好的实现安全防范：
A：号码加“0” 在QQ号码前面输入一大串“0”，然后再登录，丝毫不会影响QQ的使用（新版QQ中，0加上QQ号码长度不可超过10个字符） B：使用软件键盘 使用QQ提供的软键盘虽然比较麻烦，但也是一种简单的好办法。 C：乱序输入 如QQ的密码是“123456”，输入时先打1356，接着将鼠标单击到1后面输入2，再将鼠标移到3后输入4即可，该方法主要对付专门截获键盘动作的木马程序，由于截获键盘动作的木马程序无法获悉鼠标的移动，因此非常安全。
另附：很实用的一点QQ小窍门
1.减少QQ占用内存资源的秘笈 登陆QQ后，占用内存：约8M QQ离线，占用内存：约10M 秘笈：登陆QQ后，随便打开一个好友的对话窗口，把它最小化，QQ占用的内存就变为3M了，这对于内存小的朋友特别有用！！
2.QQ自定义头像上传成功率较高的方法 1.将图像剪裁成40*40,再大的图也是这么大.. 2.将图像转换成bmp格式 3.满足以上条件后,我还没出现上传失败的提示,每次都成功 4.避开网络高峰期,只要传上去就没问题了.可以随时更换.
3.普通QQ号克隆好友 首先只要我们先将自己原来的号和新号登陆一遍,然后在以旧号命名的文件夹里找到 user.db数据库文件,复制.再到新号的文件夹里粘贴覆盖原文件.然后再登陆新号,你会发现哇~~好友都在了,不过都是永远不上线的,呵呵.没关系,接下来就是我们最关键的一步了,打开好友管理器(别跟我说不知道在哪里哦)在好友列表里选中自己想要加的人,记住哦,要按着ctrl来选啊,选好了,把刚才选中的好友全拉到陌生人一栏里,有人要问我,怎么要删掉啊,先别急,慢慢来,在跳出的对话框里都选确定啊,这样保证才能删掉,然后到陌生人一栏里,像刚才一样选中你的好友, ^_^我拉,拉到好友列表里,哈哈这回要跳出好多要求好友确认的对话框,大功告成!!~~~慢慢点吧,虽然有点麻烦,可这是最简单的哦..
4.免费获得QQ高级群 http://group.qq.com/登陆上你的QQ会出现个框 然后点你的群! 然后点体验高级群!会出现个协议!点确定! 然后点开始使用高级群! 嘿嘿!成高级群了! 免费体验到明年2月8日 一个QQ可以给每个群都申请成为高级群! 登陆http://group.qq.com/ 登陆上你的QQ会出现个框 然后点你的群! 然后点体验高级群!会出现个协议!点确定! 然后点开始使用高级群! 嘿嘿!成高级群了! 免费体验到明年2月8日 一个QQ可以给每个群都申请成为高级群!
5.让你的QQ永不怕回收 腾讯官方网站说是 普通号码 资料空白 里边好友无或者过少 等等几条信息吧 说是三个月不登陆腾讯有权收回号码 也确实有号码被回收了 是被什么收走了呢 是被腾讯的 专业扫号程序 计算机给你扫走了 密码都是16位的随机密码? 告诉你个秘密 QQ永不怕回收1.去疼讯主站下载个 英文版本 的QQ 2.安装后登陆你的那些不想管理的我非常爱你号码 3.记得选择资料选择性别，原始资料是男的选择 F 原始资料是女的选择4.然后把资料里边的：这家伙很懒 什么也没有留下删除，记得随手 打上“ —” 5.照着疼讯的被回收的号码资料 例如：1979314这个号码 在资料里照搬依次打上 — 6 是最重要的一条：设置16位数的密码，字母加数字组合再用中文版本登陆查看号码资料 年龄34 性别 无这样就 OK 了 永远不怕被回收了 可以安全的躲避过 腾讯的计算机系统扫描回收 对号码大户很有用 免得定期登陆的麻烦
6.灵验的登录方法 相信大家或多或少都有过这样的体验，登录QQ时，小企鹅在屏幕上徒劳地闪动半天之后，bomb出来的却是服务器太忙无法登录或者超时的提示框，接连试几次都是这样的，真的有点烦人。别着急，用下面的方法一定能让你顺利登录上去的。 先说第一种方法。如果你使用的是默认登录面板登录的话，那么你可以改用“注册向导”试试，一般情况下都能成功。还不管用的话，就得使用更绝的第二种方法了——打开多个QQ窗口来同时登录同一个号码。我遇到上述情况就会同时打开三个窗口，这里面肯定会有一个能登录上去的，百试不爽。不过也有一种情况是例外的，那就是：网络断线的时候。
7.快速定位好友 现在在一个QQ里加有好几百号人是不足为奇的事，但是Q友多了也会给自己添麻烦的哟！想想看，要在这么一大堆人里找到某某MM可不是件容易的事。怎么办？跟我做吧！首先激活QQ面板，切换到某某MM所在的组，然后在键盘上按下好友昵称的首字母（如“Vc水手”取首字母“V”，而“维C水手”取拼音“wei”的首字母“W”就定位到了一组以此字母为昵称首字母的好友了，现在找起人来方便了许多吧！
8.回到好友列表顶端 当你在QQ某个组中按了向下按钮又想回到列表顶端时，你没有必要再去按那个向上按钮了。有一个化繁为简的方法是：试着与其他任何一个组之间切换一下，再回到原先的组看一看，呵呵，奇迹出现了，你又回到顶端了。
10.让头像前排 想更多地吸引MM对你的注意吗？那你在她的列表中的位置可一定要排得前一些哟！要不然人家可能会看不到你或者对你视而不见……用不着生气，想个法子让自己排得前些不就行了吗！好，为了帮你实现“企图”，这一招我教定你了。Follow me，打开“个人设定”窗口，然后在自己的昵称前点一下鼠标，再按空格键插入一两个空格（不能太多了，要不然昵称就不能完整显示了），然后点击“修改”按钮进行修改。这样，以后当对方更新了你的资料或者重新登录时，你的头像就可以排在其列表数一数二的显赫位置了（在线的情况下），现在对方要想不看见你都不可能啦。 同理，想把谁放到你的好友列表顶端，就给他“改名”，在他名字前加一两个空格就行。
11.把自己加为好友 这一招可是厉害得很，可以让自己的头像出现在本身的列表上，这不仅显得很酷，而且有很实用得功能哦（比如下面一条秘技中就可以用到）！其实最早期的QQ版本中是可以直接把自己加为好友的，但现在的版本都行不通了。但是只要我们肯动手，没有什么能难倒我们的。步骤如下：首先建议设定到“允许任何人把我列为好友”，然后切换到“黑名单”组，在里面空白处点击右键并选“添加坏人名单”，输入自己的QQ号码（什么？把我自己当成坏人了呀！），接下来再把这个“坏人”拖到“我的好友”组中去，这时会bomb出“不能添加自己”的提示，不理会它，直接退出QQ。 再一次用注册向导登录时（注意这里一定要用注册向导！），就可以看见自己的头像已经在列表中了，而且，还可以和“自己”说话呢！
12.查看隐藏的文件夹 有时我们在网吧上网需要查看某些文件夹，无奈管理软件却把它们给隐藏起来了，怎么也打不开。有了QQ就好办了，你可以利用它来另类地打开这些文件夹。方法是：在机器中打开两个QQ号码甲和乙（如果没有两个号码，可以用注册向导，在自己号码前加一个“0”登录，登录后显示号码为“0xxxxxxx”），用左键在甲中点击乙的头像并选择“传送文件”，接着随便在电脑中找个小一些的文件进行传送，由乙来接收，很快就会接收完毕，bomb出了一个很关键的窗口，提示“文件接收完毕，是否转到文件所在目录？”，这时请一定点击“是”按钮。 嘿嘿，现在可以随心所欲地查看该文件夹了吧！
13.与不喜欢的人“永别”俗话说“林子大了，什么鸟都有”，在用QQ聊天时我们也会有碰到“坏鸟”的。你把对方删除掉也不见得能得到清净，他（她）还是可以在陌生人里喋喋不休地骚扰你。隐患就在于你的头像还保留在对方的列表里。所以我要提醒你，以后遇到这样的情况一定不能手软，就一定要毫不犹豫地把“坏鸟”拖入“黑名单”中。这样，双方都会彻底地从对方列表中消失了，也就没有人能烦到你了。当然如果对方已经赖在“陌生人”里了也还有补救措施，很简单，同样把这个人拖入“黑名单”就行了。
15.密码防范
现在网上（特别是网吧）盗取QQ密码的方法层出不穷 搞得QQ用户人人自危。有一种通过监视来获得密码的工具更是防不胜防，它一般在本地机器中隐藏运行，会自动记录那些号码位数不超过9位的QQ登录密码，甚至还可以自动把这些密码发送到指定的邮箱。基于它的原理，我们就可以采取对应的防黑措施了。具体做法是：在登录的时候，在号码前加入一串的“0”（比如20个），我们会发现这并不影响正常的登录，但是你在本地机器上的号码却变成了一大串的“0”。这样一来，再聪明的监视盗号工具也会对这种Zhang号码不理不睬了，当然你也就不必担心QQ密码泄露了 "轻用其芒，动即有伤，是为凶器；深藏若拙，临机取决，是为利器。HK不是从真正意义上的去黑，而是挑战自己，挑战困难，坚毅，执著，智慧……"
16.禁止QQ登陆一妙招 如果你不想别人使用QQ该怎么办呢？删除它当然简单，但那样太明显了。如果你使用的是Win2000或者WinXP，那么你可以采用禁止端口的方法来使QQ无法登陆。由于QQ使用UDP协议通讯，因此我们可以将使用该协议的端口禁用来防止别人使用QQ。首先需要知道你的电脑正在使用哪些端口，在DOS窗口中输入“netstat -a”就可以列出所使用的端口，由于QQ只用到UDP协议，你只要记下UDP所对应的端口就可以了。然后打开“本地连接”的属性窗口，选择其中的“Internet 协议(TCP/IP)”选择属性，然后选择“高级”按钮并打开其中的“选项”，选定“TCP/IP筛选”并点击“属性”。 IFiZR:m 17.使QQ头像永远在线完全教程 `2MUO2R@P 1.得到特殊字符 )).O2 建立一个文本文档，打开它，然后左手按住Alt键，右手输入30（或者31），会得到一个黑色方块字符。 D,R[9KK$ 这个字符输入到QQ资料栏里时，占一个全角字符间距的空白。我们暂且把这个字符叫做“ALT30”吧。在下文中需要多次用到它的。 SB#DL=o? 注：该字符在win2000+QQ0825下测试通过 1GBn_Zicu 但是在Win98下，无法在文本文档获得ALT30字符，请复制下面引号中的隐含字符。 9Kl0Q&II 2.计算你想要的头像号码 @hT}1^am) 修改个人资料，选择需要的头像，在昵称后面加上四个ALT30字符(上面提到的). AmU_!B2 完成以后使用另外一个QQ号码查看该号码的资料，在城市一栏的数字就是你选择的头像对应的号码(它一定是3的倍数)。 7Z!rcG 3.具体修改方法 pkmS;a4 下文的“ALT30”字符我们用■代替 yPdg; 注：下面的黑方块不是ALT30字符，是为了起到标示作用的黑方块：） 0GFI6@} 把上面东东复制新到你的QQ个人主页里，确定，然后让网友更你的资料看看 t@7 { 其项值 格式为： ~tLl:U:o [个人主页]■[身份验证选项]■■■[头像代码]■■■[个人说明]■[城市]■■■■[保密选项A]■[保密选项B]■[毕业院校]■[星座]■[生肖]■[血型] 'qpFp (1). 取3N，个人资料显示3N号头像，即N号人物上线头像. &IAXS!=@W a.上线时，在线好友中显示3N号头像，似N号人物上线 KmZ:18^`-S b.隐身(离线)时，在线好友中显示3N+1号头像，似N号人物隐身 V.mY p(q$T c.离开时，在线好友中显示3N+2号头像，似N号人物离开 Q/x?dF2 (2).取3N+1，个人资料显示3N+1号头像，即N号人物隐身头像. {"9Kzm a.上线时，在线好友中显示3N+1号头像，似N号人物隐身 4F;A\B_ b.隐身(离线)时，在线好友中显示3N+2号头像，似N号人物离开 *= t L^5@ c.离开时，在线好友中显示3N+3号头像，似N+1号人物上线 6q ppU (3).取3N-1，个人资料显示3N-1号头像，即N-1号人物离开头像。 k]=8y;?
14.让数据重见天日
作为在网吧使用QQ的用户，由于经常“行踪不定”，学会QQ数据的备份与恢复是很重要的。如果只要备份QQ消息数据（包括聊天记录、用户信息以及系统消息等）可以直接用“消息管理器”来实现。操作很简单，我就不多说了。如果要备份全部的数据信息（还包括用户信息、分组信息、好友列表等），你就应该找到一个以你的QQ号码命名的用户目录文件夹（默认路径在Crogram FilesTencent下），把它备份就可以了。这些备份数据一般都不大，你完全可以压缩后把它作为附件发送到E-mail里，下次在别处使用QQ时再下载过来，然后通过“消息管理器”把消息数据导入或者用目录文件覆盖同名目录（注意之前要先登录一次，退出后覆盖），这样就大功告成，你的数据资料又奇迹般地回来了！
QQ快捷键
1.Alt+S 快速回复 2.Alt+C 关闭当前窗口 3.Alt+H 打开聊天记录 4.Alt+T 更改消息模式 5.Ait+J 打开聊天纪录 6.Ctrl+A 全选当前对话框里的内容 7.Ctrl+F QQ里直接显示字体设置工具条 8.Ctrl+J 输入框里回车(跟回车一个效果) 9.Ctrl+M 输入框里回车(跟回车一个效果) 10.Ctrl+L 对输入框里当前行的文字左对齐 11.Ctrl+R 对输入框里当前行的文字右对齐 12.Ctrl+E 对输入框里当前行的文字居中 12.Ctrl+V 在qq对话框里实行粘贴 13.Ctrl+Z 清空/恢复输入框里的文字 14.Ctrl+～ 隐藏/显示.QQ于无形.（右下角托盘里也没了） 15.Ctrl+回车 快速回复 这个可能是聊QQ时最常用到的了 16.Ctrl+Alt+Z 快速提取消息 17.Ctrl+Alt+A 捕捉屏幕
QQ用户请注意了,这5个文件夹要定时清理! 提升内存！！！ 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼ad 这里面是QQ广告，删掉！ 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼flashshow 这是你的QQ好友的QQ秀文件夹，可以放心删除 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼flashshow 2 这是你的QQ好友的QQ秀文件夹，可以放心删除 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼QQFileCache 这是你的空间或者别人空间里的一些临时文件，删掉 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼QQMusic＼WhirlCache 这里面是你登陆自己的QQ空间或者别人的空间的空间音乐的临时文件夹， 这里面的文件会占很的空间，所以尽快删除掉吧！ 一定要时常清理QQ的两个文件夹(时间长站内存超大!) QQ的朋友们，你们在重装QQ前，一定会备份一下你的号码文件夹吧？尤其是那些将QQ装在C盘下的朋友，如果有一天你发现你的硬盘空间越来越小了，是不是会感觉到莫名其妙，开始怀疑是中病毒了还是怎样。这时候一定记得到下面这2个文件夹看看，是不是已经塞进了好多垃圾！ 安装目录:\你的QQ号码\CustomFaceRecv 安装目录:\你的QQ号码\image 这2个文件夹是QQ的图片缓存目录，别人给你发的表情、截图，或者不管是不是给你的，只要在群中发出来的图片，都会保存在这里。时间久了，这2个文件可以达到GB级！！！！！当数量过大时，你就无法再接收到别人发给你的图片，你也无法通过截图，发图片给别人，通常会提示“图片压缩失败”。这时候你可以放心删除这两个文件夹下的所有图片，不会影响你已经保存的那些表情和头像的，它们不在这2个文件夹内。 如果你有多个号码，记得把相应号码下的这2个文件夹内的东东统统删除。 提示：有时候由于图片上万，系统处理时会比较慢，请耐心等待 大家一定要记住勤劳一点，多清理自己的QQ啦。
9.打造个性的资料 你有没有发现有些人QQ资料填得很特别很有个性呢？比如“国家/地区”填的根本不是下拉列表中的内容，甚至可以换成一个贴图，你会觉得不可思议吧？其实你也完全可以拥有这么个性的资料的。实现方法很简单，在填写资料时你可以不理会那些下拉列表，直接填入你想填的内容即可（贴图可以到专门的网站去Copy）。但请注意并不是所有下拉列表都是形同虚设的，有些内容必须择其一才能填入。
2.如何让QQ昵称和自动回复与众不同. 在昵称和自动回复中添加QQ支持的表情图标快捷键即可打造个性昵称和回复消息.如加入太阳的表情图标,即可写入\"/ty\",这些表情图标所对应的快捷键可单击QQ聊天窗口的表情下拉框,在每个图标上用鼠标停留一会即可显示对应的快捷键文字.
3.强制聊天 如出于特殊原因，必须向一个非好友的QQ用户发送消息时，可用一段强制聊天代码实现，在浏览器中输入以下这段代码：HTTP：//WPA.QQ.COM/MSGRD?V=1&UIN=******&SITE=IOSHENMUE&MENU=YES,随后将代码中的星号 换成需联系用户的QQ号码并在浏览器中打开该地址即可.这样无论对方是否为QQ好友,均可直接发送消息.执行上述操作时最好开一个QQ号.如果开两个以上的QQ,则会出现对话框让用户选择使用QQ号码与对方聊天.
4.隐藏摄像头. 如果安了摄象头又不想让系统自动出现,可以隐藏摄象头,进入\"个人设置-系统设置-本地安全\"选项卡,在\"状态显示\"中,勾选\"不要将我列在在线视频用户的列表中\"一项即可.同样,勾选\"游戏状态不可见\"和\"聊天室状态不可见\"两项,就可隐藏自己的游戏和聊天室里的活动行踪.
5.禁止上线自动提示. 单击QQ面板的\"菜单\"的\"个人设置\"子菜单的\"系统设置\",单击\"基本设置\",将状态显示栏中的\"禁止所有用户上线提示\",点击确定即可.
6.从对方好友名单中消失. 如果要将自己从对方的好友名单中消失,但又需要对方保留在自己的好友名单中,要求对方删除自己的想法绝对不妥,但可借助QQ商务版本TM来实现神秘\"蒸发\",直接用TM登陆,在好友列表中找到对方,在其头像上单击右键, 选择\"将自己从对方联系人名单中删除\",最后在随后出现的警告对话框中进行确定即可,再登陆QQ,就行了.
7.揪出隐身好友. 隐身是QQ一项独特功能,虽然灰暗的图标免受了不少打拢,可用户仍有几种方法可找出隐身好友,下面只介绍一种:发送一个语音视频聊天请求,或发送某个文件给好友,如对方确实在线的话,会有以下几种处理方式,A:\"接收\"或\"拒绝\".此时窗口中会弹出相应的提示,即可确定对方处于隐身状态.B:直接关闭.对方即不接受也不拒绝,而直接将弹出窗口关闭,那么窗口同样会有对方拒绝的提示,同样可确定对方隐身.C:最小化弹出窗口,此时窗口无任何提示,无法确定对方隐身状态,但该方式下,对方的QQ会一直开着邀请窗口并占用资源.D:直接下线.对方不关闭弹出窗口而直接下线,此后再关闭弹出窗口,由于已下线,因此任何举动不会被传送,随后再隐身上线即可,这是对付试探隐身的最好办法。
8.自动找出不聊天好友.目前的QQ版本允许添加500个好友,当人满为患的时候即需删除一些好友,而删除的衡量标准往往是添加后几乎没有聊天的好友,其实使用一个简单的批处理命令即可迅速查出哪些好友没有聊天,随后可将其逐个删除.首先将QQ的聊天记录导出为myinfo.txt文件,随后编写一个批处理文件,内容如下 :findstr\"消息对象为:\"myinfo.txt>myfr.txt 然后将该批处理文件和myinfo.txt放在同一目录中,运行该批处理文件.此生会生成一个myfr.txt文件,文件中包含所有聊天的好友列表,随后只需通过查找方式来对照列表,将没有聊天的好友删除即可.
9.在QQ中看网络电视. 这属于QQ的隐藏功能，登陆QQ（2005beta3），单击QQ侧边栏的“用户自定义面板”。然后，单击“收藏夹”中的“设置”选项，弹出一个收藏列表框，可看到“Q_Radio”选项，勾选该选项就可以进行网络收音机。随后，添加一个“Q_TV”，链接地址输入“http://www.qq-tv.com”，并勾选即可。
10.巧护聊天记录. QQ的聊天记录也是一种不亚于密码的绝对隐私，保护聊天记录等本地信息，可以通过设置本地消息口令来实现。首先在QQ界面上选择“系统参数”，在“系统参数”视察选择“安全设置”标签，随后选择“启用本地消息加密”，再依次输入口令并确认口令即可。此外，为保险起见，建议勾选“启用本地消息加密口令提示”，设定提示问题和问题答案，按下“确定”使设定生效。此后在启动QQ输入账号和密码后，软件还会要求输入本地消息口令，否则无法登陆。
11.快速定位好友. 目前不少网友的QQ列表中有上百个好友，如何从长串列表中快速找到某个好友呢？很简单，在好友列表中，按下好友昵称的首字母即可快速定位，如“alan”的首个字母是“a”，“猛张飞”的拼音是“meng”，首个字母就是“M”，直接就能快速找到了。
12.改变地理位置 目前不少QQ版本（如珊瑚虫版）都有显示IP和地理位置的功能，很容易暴露网友的隐私。不过只需使用代理服务器，即可改变自己的地理位置。首先搜索到可用的代理服务器地址，在QQ中选择“个人设置-系统设置-代理设置”选项，选择“使用自定义的网络设置”，类型按代理服务器属性进行设置，如代理服务器属性为“sock5”，那么选择“sock5代理服务器”，在服务器一栏中并填入IP地址端口、用户名和密码等信息即可。
13.安全防范 在公共场所（如网吧）使用QQ必须得小心，以防别人盗号，现在的黑客、木马太多了。不过也有几条妙计可帮助你较好的实现安全防范：
A：号码加“0” 在QQ号码前面输入一大串“0”，然后再登录，丝毫不会影响QQ的使用（新版QQ中，0加上QQ号码长度不可超过10个字符） B：使用软件键盘 使用QQ提供的软键盘虽然比较麻烦，但也是一种简单的好办法。 C：乱序输入 如QQ的密码是“123456”，输入时先打1356，接着将鼠标单击到1后面输入2，再将鼠标移到3后输入4即可，该方法主要对付专门截获键盘动作的木马程序，由于截获键盘动作的木马程序无法获悉鼠标的移动，因此非常安全。
另附：很实用的一点QQ小窍门
1.减少QQ占用内存资源的秘笈 登陆QQ后，占用内存：约8M QQ离线，占用内存：约10M 秘笈：登陆QQ后，随便打开一个好友的对话窗口，把它最小化，QQ占用的内存就变为3M了，这对于内存小的朋友特别有用！！
2.QQ自定义头像上传成功率较高的方法 1.将图像剪裁成40*40,再大的图也是这么大.. 2.将图像转换成bmp格式 3.满足以上条件后,我还没出现上传失败的提示,每次都成功 4.避开网络高峰期,只要传上去就没问题了.可以随时更换.
3.普通QQ号克隆好友 首先只要我们先将自己原来的号和新号登陆一遍,然后在以旧号命名的文件夹里找到 user.db数据库文件,复制.再到新号的文件夹里粘贴覆盖原文件.然后再登陆新号,你会发现哇~~好友都在了,不过都是永远不上线的,呵呵.没关系,接下来就是我们最关键的一步了,打开好友管理器(别跟我说不知道在哪里哦)在好友列表里选中自己想要加的人,记住哦,要按着ctrl来选啊,选好了,把刚才选中的好友全拉到陌生人一栏里,有人要问我,怎么要删掉啊,先别急,慢慢来,在跳出的对话框里都选确定啊,这样保证才能删掉,然后到陌生人一栏里,像刚才一样选中你的好友, ^_^我拉,拉到好友列表里,哈哈这回要跳出好多要求好友确认的对话框,大功告成!!~~~慢慢点吧,虽然有点麻烦,可这是最简单的哦..
4.免费获得QQ高级群 http://group.qq.com/登陆上你的QQ会出现个框 然后点你的群! 然后点体验高级群!会出现个协议!点确定! 然后点开始使用高级群! 嘿嘿!成高级群了! 免费体验到明年2月8日 一个QQ可以给每个群都申请成为高级群! 登陆http://group.qq.com/ 登陆上你的QQ会出现个框 然后点你的群! 然后点体验高级群!会出现个协议!点确定! 然后点开始使用高级群! 嘿嘿!成高级群了! 免费体验到明年2月8日 一个QQ可以给每个群都申请成为高级群!
5.让你的QQ永不怕回收 腾讯官方网站说是 普通号码 资料空白 里边好友无或者过少 等等几条信息吧 说是三个月不登陆腾讯有权收回号码 也确实有号码被回收了 是被什么收走了呢 是被腾讯的 专业扫号程序 计算机给你扫走了 密码都是16位的随机密码? 告诉你个秘密 QQ永不怕回收1.去疼讯主站下载个 英文版本 的QQ 2.安装后登陆你的那些不想管理的我非常爱你号码 3.记得选择资料选择性别，原始资料是男的选择 F 原始资料是女的选择4.然后把资料里边的：这家伙很懒 什么也没有留下删除，记得随手 打上“ —” 5.照着疼讯的被回收的号码资料 例如：1979314这个号码 在资料里照搬依次打上 — 6 是最重要的一条：设置16位数的密码，字母加数字组合再用中文版本登陆查看号码资料 年龄34 性别 无这样就 OK 了 永远不怕被回收了 可以安全的躲避过 腾讯的计算机系统扫描回收 对号码大户很有用 免得定期登陆的麻烦
6.灵验的登录方法 相信大家或多或少都有过这样的体验，登录QQ时，小企鹅在屏幕上徒劳地闪动半天之后，bomb出来的却是服务器太忙无法登录或者超时的提示框，接连试几次都是这样的，真的有点烦人。别着急，用下面的方法一定能让你顺利登录上去的。 先说第一种方法。如果你使用的是默认登录面板登录的话，那么你可以改用“注册向导”试试，一般情况下都能成功。还不管用的话，就得使用更绝的第二种方法了——打开多个QQ窗口来同时登录同一个号码。我遇到上述情况就会同时打开三个窗口，这里面肯定会有一个能登录上去的，百试不爽。不过也有一种情况是例外的，那就是：网络断线的时候。
7.快速定位好友 现在在一个QQ里加有好几百号人是不足为奇的事，但是Q友多了也会给自己添麻烦的哟！想想看，要在这么一大堆人里找到某某MM可不是件容易的事。怎么办？跟我做吧！首先激活QQ面板，切换到某某MM所在的组，然后在键盘上按下好友昵称的首字母（如“Vc水手”取首字母“V”，而“维C水手”取拼音“wei”的首字母“W”就定位到了一组以此字母为昵称首字母的好友了，现在找起人来方便了许多吧！
8.回到好友列表顶端 当你在QQ某个组中按了向下按钮又想回到列表顶端时，你没有必要再去按那个向上按钮了。有一个化繁为简的方法是：试着与其他任何一个组之间切换一下，再回到原先的组看一看，呵呵，奇迹出现了，你又回到顶端了。
10.让头像前排 想更多地吸引MM对你的注意吗？那你在她的列表中的位置可一定要排得前一些哟！要不然人家可能会看不到你或者对你视而不见……用不着生气，想个法子让自己排得前些不就行了吗！好，为了帮你实现“企图”，这一招我教定你了。Follow me，打开“个人设定”窗口，然后在自己的昵称前点一下鼠标，再按空格键插入一两个空格（不能太多了，要不然昵称就不能完整显示了），然后点击“修改”按钮进行修改。这样，以后当对方更新了你的资料或者重新登录时，你的头像就可以排在其列表数一数二的显赫位置了（在线的情况下），现在对方要想不看见你都不可能啦。 同理，想把谁放到你的好友列表顶端，就给他“改名”，在他名字前加一两个空格就行。
11.把自己加为好友 这一招可是厉害得很，可以让自己的头像出现在本身的列表上，这不仅显得很酷，而且有很实用得功能哦（比如下面一条秘技中就可以用到）！其实最早期的QQ版本中是可以直接把自己加为好友的，但现在的版本都行不通了。但是只要我们肯动手，没有什么能难倒我们的。步骤如下：首先建议设定到“允许任何人把我列为好友”，然后切换到“黑名单”组，在里面空白处点击右键并选“添加坏人名单”，输入自己的QQ号码（什么？把我自己当成坏人了呀！），接下来再把这个“坏人”拖到“我的好友”组中去，这时会bomb出“不能添加自己”的提示，不理会它，直接退出QQ。 再一次用注册向导登录时（注意这里一定要用注册向导！），就可以看见自己的头像已经在列表中了，而且，还可以和“自己”说话呢！
12.查看隐藏的文件夹 有时我们在网吧上网需要查看某些文件夹，无奈管理软件却把它们给隐藏起来了，怎么也打不开。有了QQ就好办了，你可以利用它来另类地打开这些文件夹。方法是：在机器中打开两个QQ号码甲和乙（如果没有两个号码，可以用注册向导，在自己号码前加一个“0”登录，登录后显示号码为“0xxxxxxx”），用左键在甲中点击乙的头像并选择“传送文件”，接着随便在电脑中找个小一些的文件进行传送，由乙来接收，很快就会接收完毕，bomb出了一个很关键的窗口，提示“文件接收完毕，是否转到文件所在目录？”，这时请一定点击“是”按钮。 嘿嘿，现在可以随心所欲地查看该文件夹了吧！
13.与不喜欢的人“永别”俗话说“林子大了，什么鸟都有”，在用QQ聊天时我们也会有碰到“坏鸟”的。你把对方删除掉也不见得能得到清净，他（她）还是可以在陌生人里喋喋不休地骚扰你。隐患就在于你的头像还保留在对方的列表里。所以我要提醒你，以后遇到这样的情况一定不能手软，就一定要毫不犹豫地把“坏鸟”拖入“黑名单”中。这样，双方都会彻底地从对方列表中消失了，也就没有人能烦到你了。当然如果对方已经赖在“陌生人”里了也还有补救措施，很简单，同样把这个人拖入“黑名单”就行了。
15.密码防范
现在网上（特别是网吧）盗取QQ密码的方法层出不穷 搞得QQ用户人人自危。有一种通过监视来获得密码的工具更是防不胜防，它一般在本地机器中隐藏运行，会自动记录那些号码位数不超过9位的QQ登录密码，甚至还可以自动把这些密码发送到指定的邮箱。基于它的原理，我们就可以采取对应的防黑措施了。具体做法是：在登录的时候，在号码前加入一串的“0”（比如20个），我们会发现这并不影响正常的登录，但是你在本地机器上的号码却变成了一大串的“0”。这样一来，再聪明的监视盗号工具也会对这种Zhang号码不理不睬了，当然你也就不必担心QQ密码泄露了 "轻用其芒，动即有伤，是为凶器；深藏若拙，临机取决，是为利器。HK不是从真正意义上的去黑，而是挑战自己，挑战困难，坚毅，执著，智慧……"
16.禁止QQ登陆一妙招 如果你不想别人使用QQ该怎么办呢？删除它当然简单，但那样太明显了。如果你使用的是Win2000或者WinXP，那么你可以采用禁止端口的方法来使QQ无法登陆。由于QQ使用UDP协议通讯，因此我们可以将使用该协议的端口禁用来防止别人使用QQ。首先需要知道你的电脑正在使用哪些端口，在DOS窗口中输入“netstat -a”就可以列出所使用的端口，由于QQ只用到UDP协议，你只要记下UDP所对应的端口就可以了。然后打开“本地连接”的属性窗口，选择其中的“Internet 协议(TCP/IP)”选择属性，然后选择“高级”按钮并打开其中的“选项”，选定“TCP/IP筛选”并点击“属性”。 IFiZR:m 17.使QQ头像永远在线完全教程 `2MUO2R@P 1.得到特殊字符 )).O2 建立一个文本文档，打开它，然后左手按住Alt键，右手输入30（或者31），会得到一个黑色方块字符。 D,R[9KK$ 这个字符输入到QQ资料栏里时，占一个全角字符间距的空白。我们暂且把这个字符叫做“ALT30”吧。在下文中需要多次用到它的。 SB#DL=o? 注：该字符在win2000+QQ0825下测试通过 1GBn_Zicu 但是在Win98下，无法在文本文档获得ALT30字符，请复制下面引号中的隐含字符。 9Kl0Q&II 2.计算你想要的头像号码 @hT}1^am) 修改个人资料，选择需要的头像，在昵称后面加上四个ALT30字符(上面提到的). AmU_!B2 完成以后使用另外一个QQ号码查看该号码的资料，在城市一栏的数字就是你选择的头像对应的号码(它一定是3的倍数)。 7Z!rcG 3.具体修改方法 pkmS;a4 下文的“ALT30”字符我们用■代替 yPdg; 注：下面的黑方块不是ALT30字符，是为了起到标示作用的黑方块：） 0GFI6@} 把上面东东复制新到你的QQ个人主页里，确定，然后让网友更你的资料看看 t@7 { 其项值 格式为： ~tLl:U:o [个人主页]■[身份验证选项]■■■[头像代码]■■■[个人说明]■[城市]■■■■[保密选项A]■[保密选项B]■[毕业院校]■[星座]■[生肖]■[血型] 'qp
14.让数据重见天日
作为在网吧使用QQ的用户，由于经常“行踪不定”，学会QQ数据的备份与恢复是很重要的。如果只要备份QQ消息数据（包括聊天记录、用户信息以及系统消息等）可以直接用“消息管理器”来实现。操作很简单，我就不多说了。如果要备份全部的数据信息（还包括用户信息、分组信息、好友列表等），你就应该找到一个以你的QQ号码命名的用户目录文件夹（默认路径在Crogram FilesTencent下），把它备份就可以了。这些备份数据一般都不大，你完全可以压缩后把它作为附件发送到E-mail里，下次在别处使用QQ时再下载过来，然后通过“消息管理器”把消息数据导入或者用目录文件覆盖同名目录（注意之前要先登录一次，退出后覆盖），这样就大功告成，你的数据资料又奇迹般地回来了！
QQ快捷键
1.Alt+S 快速回复 2.Alt+C 关闭当前窗口 3.Alt+H 打开聊天记录 4.Alt+T 更改消息模式 5.Ait+J 打开聊天纪录 6.Ctrl+A 全选当前对话框里的内容 7.Ctrl+F QQ里直接显示字体设置工具条 8.Ctrl+J 输入框里回车(跟回车一个效果) 9.Ctrl+M 输入框里回车(跟回车一个效果) 10.Ctrl+L 对输入框里当前行的文字左对齐 11.Ctrl+R 对输入框里当前行的文字右对齐 12.Ctrl+E 对输入框里当前行的文字居中 12.Ctrl+V 在qq对话框里实行粘贴 13.Ctrl+Z 清空/恢复输入框里的文字 14.Ctrl+～ 隐藏/显示.QQ于无形.（右下角托盘里也没了） 15.Ctrl+回车 快速回复 这个可能是聊QQ时最常用到的了 16.Ctrl+Alt+Z 快速提取消息 17.Ctrl+Alt+A 捕捉屏幕
QQ用户请注意了,这5个文件夹要定时清理! 提升内存！！！ 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼ad 这里面是QQ广告，删掉！ 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼flashshow 这是你的QQ好友的QQ秀文件夹，可以放心删除 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼flashshow 2 这是你的QQ好友的QQ秀文件夹，可以放心删除 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼QQFileCache 这是你的空间或者别人空间里的一些临时文件，删掉 安装目录＼ProgramFiles＼Tencent＼QQ＼QQMusic＼WhirlCache 这里面是你登陆自己的QQ空间或者别人的空间的空间音乐的临时文件夹， 这里面的文件会占很的空间，所以尽快删除掉吧！ 一定要时常清理QQ的两个文件夹(时间长站内存超大!) QQ的朋友们，你们在重装QQ前，一定会备份一下你的号码文件夹吧？尤其是那些将QQ装在C盘下的朋友，如果有一天你发现你的硬盘空间越来越小了，是不是会感觉到莫名其妙，开始怀疑是中病毒了还是怎样。这时候一定记得到下面这2个文件夹看看，是不是已经塞进了好多垃圾！ 安装目录:\你的QQ号码\CustomFaceRecv 安装目录:\你的QQ号码\image 这2个文件夹是QQ的图片缓存目录，别人给你发的表情、截图，或者不管是不是给你的，只要在群中发出来的图片，都会保存在这里。时间久了，这2个文件可以达到GB级！！！！！当数量过大时，你就无法再接收到别人发给你的图片，你也无法通过截图，发图片给别人，通常会提示“图片压缩失败”。这时候你可以放心删除这两个文件夹下的所有图片，不会影响你已经保存的那些表情和头像的，它们不在这2个文件夹内。 如果你有多个号码，记得把相应号码下的这2个文件夹内的东东统统删除。 提示：有时候由于图片上万，系统处理时会比较慢，请耐心等待 大家一定要记住勤劳一点，多清理自己的QQ啦。
9.打造个性的资料 你有没有发现有些人QQ资料填得很特别很有个性呢？比如“国家/地区”填的根本不是下拉列表中的内容，甚至可以换成一个贴图，你会觉得不可思议吧？其实你也完全可以拥有这么个性的资料的。实现方法很简单，在填写资料时你可以不理会那些下拉列表，直接填入你想填的内容即可（贴图可以到专门的网站去Copy）。但请注意并不是所有下拉列表都是形同虚设的，有些内容必须择其一才能填入。
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