DNA 纯化

在生物技术实验中，我们粗提取的DNA需分离纯化去处蛋白质等杂质，我们都需要将最终的结果在琼脂糖凝胶， 或PAGE凝胶上走电泳观察，以判断我们实验的正确性以及DNA片段的完整性。同时通过紫外分光光度计测定OD260,OD280的吸收值，以确定DNA的浓度和纯度。
核酸经凝胶电泳后，在EB（溴化乙锭）中浸染，核酸分子与溴化乙锭结合后， 能吸收300-360mm波长的紫外光，同时诱发出液长为590nm的红橙色荧光，从而可通过照像机摄影，凝胶成像系统记录实验结果。DNA浓度的计算根据郎伯-比尔定理（E=abc）计算。根据经验1OD260=0.05ug/ul DNA。DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。
实验试剂及器材
酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）
70％乙醇 TE buffer
RNase
琼脂糖
TBE电泳缓冲液
电泳设备
紫外分光光度计
凝胶成像系统
1. 加入RNase至终浓度10μg/ul 37℃反应1小时。
2. 加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）等体积各抽提2-3次，取上清。
3. 加入1/10倍体积3M NaAc(pH5.2)，2倍体积无水乙醇混匀，－20℃下10min-30min。
4. 15000rpm，离心10分钟。
5. DNA沉淀用 70％乙醇洗2次， 37℃烘干DNA（无乙醇）。
6. 100μl TE buffer溶解沉淀
7 取20ul DNA母液稀释至1000μl，在紫外分光光度计上测OD260,OD280。
8. 取10 ul DNA, 在 0.8％琼脂糖凝胶120伏，1-2小时电泳，
9. 在凝胶成像系统上记录和分析结果。